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rd29A启动子克隆及对低温响应的研究被引量：9: 2004年; 研究从拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组DNA克隆了rd29A基因启动子,序列分析表明该启动子具有两个干旱、高盐和低温响应顺式作用元件(DRE),在851～856 bp碱基处为TATA box,其它主要调控区域也存在。然后,分别用rd29A启动子和CaMV 35S启动子,构建了具有绿色荧光蛋白(GFP)基因的植物表达载体pBIG和pBIRG。通过基因枪导入法转化洋葱表皮细胞,在25 ℃和4 ℃条件下培养16 h后,用荧光显微镜观察GFP基因的表达水平。结果表明,在低温条件下,rd29A启动子的活性明显高于CaMV 35S启动子,说明rd29A启动子是一低温诱导型启动子,可满足在低温条件下使目的基因在转基因植物中进行表达的目的。; 白斌张金文郭志鸿陈正华; 关键词：RD29A启动子绿色荧光蛋白基因基因枪法表达活性

几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因克隆微生物表达和抑菌效果研究被引量：13: 2004年; 采用PCR扩增的方法,扩增获得几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的基因,分别将其基因克隆到原核表达载体pET28a(+)上,构建了原核表达载体pETChi和pETGlu。经IPTG诱导后几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因在大肠杆菌BL21中得到高效表达。通过对连孢(Alternaria alternate)的抑菌实验表明,这两基因的表达产物对此真菌有较强的抵抗能力。; 刘玲玲张金文王旺田陈正华; 关键词：几丁质酶 3-葡聚糖酶抑菌效果

转Aclnv反义基因马铃薯品系的生理特性及POD同工酶变化分析: 2008年; 对转Aclnv反义基因马铃薯品系的相对电导率、丙二醛含量(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)活性进行检测.结果表明:转基因"大西洋"品系的相对电导率显著低于受体品种,且C2代的MDA含量显著低于受体水平;转基因"台湾红皮"品系相对电导率和MDA含量与受体品种无显著差异;Aclnv反义基因的导入对"大西洋"和"台湾红皮"两个马铃薯品系的SOD含量影响不大.对转Aclnv反义基因马铃薯品系过氧化物酶同工酶谱带分析表明,转Aclnv反义基因马铃薯品系与受体亲本存在明显的变异.; 崔文娟张金文孟亚雄王旺田俞丽娟; 关键词：马铃薯相对电导率丙二醛

低温条件下转AcInv反义基因马铃薯品系的干物质、淀粉和还原糖含量变化被引量：4: 2006年; 检测低温(4℃)贮藏条件下转AcInv反义基因与否的马铃薯品系块茎中干物质、淀粉和还原糖含量变化的结果表明:随着低温贮藏时间的延长,各转基因品系块茎中干物质含量变化不大,淀粉含量虽有下降但较为平缓;转基因品系中的还原糖含量增加幅度比受体品种的明显降低,转AcInv反义基因的‘甘农薯1号’和‘大西洋’块茎抗低温糖化能力明显高于未转AcInv反义基因的品系。; 成娟张金文王蒂; 关键词：马铃薯低温贮藏干物质淀粉还原糖

马铃薯块茎RNA提取及RT-PCR法克隆酸性转化酶基因被引量：6: 2005年; 马铃薯块茎由于富含多糖和酚类物质造成RNA提取难度大。通过在SDS-phenol提取缓冲液中加入2%PVP及10mmol/L半胱氨酸以除去大量的酚类物质,利用改进后的SDS-酚法提取的马铃薯块茎总RNA电泳结果表明,总RNA质量高于未经改进的方法。并进行RT-PCR克隆与马铃薯块茎低温糖化反应过程密切相关的块茎酸性转化酶(acidinvertase)基因,经核酸序列对比分析,与公布的已知序列具有98.96%的同源性,为利用反义技术抑制酸性转化酶活性进行马铃薯块茎抗低温糖化研究作好了准备工作。; 白斌张金文; 关键词：马铃薯块茎 RNA提取 RT-PCR法酸性转化酶 PCR克隆

维管特异表达启动子BSP的克隆与活性检测被引量：1: 2012年; 为了研究维管特异表达启动子BSP的活性和组织特异性,从杨树基因组中克隆得到维管特异表达启动子BSP,利用该启动子与绿色荧光蛋白(GFP)报告基因构建植物表达载体,采用基因枪法转化烟草叶片,并在高渗培养基上培养过夜,后转移到诱导培养基上(MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+Kan100mg/L)培养生根并长到一定高度后,剪下已形成维管组织的叶脉和根,制成切片,然后在OLYPUSBX51/BX52型荧光显微镜下用蓝光激发,观察各个组织细胞中的绿色荧光,同时以未转化的烟草材料做为对照。结果表明:BSP启动子所驱动的GFP基因在烟草的维管组织细胞中得到了高水平的表达,而在烟草的其他组织及对照的任何组织中几乎不表达。通过GFP在烟草维管组织中的瞬时表达,表明了该启动子具有维管组织特异性表达活性特点。; 刘玲玲张金文; 关键词：报告基因

一种快速检测启动子调控基因表达活性方法的探讨被引量：4: 2005年; 启动子活性检测是基因工程实验的重要组成部分,利用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,对rd29A启动子在受体细胞中调控基因表达的活性进行检测,采用基因枪法进行对洋葱表皮细胞的遗传转化,培养24h后在荧光显微镜下观察GFP基因的表达情况,并通过软件测定不同培养条件下GFP基因表达后的荧光强度,能较为准确的鉴定该启动子的活性大小,并达到量化目的。方法简单、省时、可靠,可以作为一种有效的检测启动子活性的方法。; 白斌张金文郭志鸿; 关键词：表达活性 RD29A启动子调控基因表达 GFP基因基因枪法镜下观察

辣椒离体培养及再生体系的研究被引量：28: 2006年; 选用9个辣椒（Capsicum annuum L.）品种（系）,研究了不同激素组合、基因型、外植体类型、苗龄和AgNO3等因素对外植体不定芽分化和伸长的影响.结果表明,在6-BA/IAA为10∶1配比下,有利于辣椒外植体的分化再生,而6-BA/IAA为3∶1配比下适合于再生芽的伸长;不同品种辣椒的再生能力差别较大,分化率在13.3%～90.0%之间;辣椒子叶再生能力比下胚轴强,是较好的外植体材料;12～16 d苗龄的外植体分化频率较高;添加4 mg·L^-1 AgNO3可使芽分化率平均提高16.9%.通过比较,筛选出了适合于辣椒芽分化的培养基为MB5（MS无机盐＋B5有机成分）＋5 mg·L^-1 6-BA＋0.5 mg·L^-1 IAA＋4 mg·L^-1 AgNO3,芽伸长培养基为MB5＋3 mg·L^-1 6-BA＋1 mg·L^-1 IAA＋2 mg·L^-1 GA3＋4 mg·L^-1 AgNO3,生根培养基为1/2 MS＋0.2 mg·L^-1 IAA＋0.1 mg·L^-1 NAA.; 张金文范兴中王莹王汉宁孟亚雄龙凤; 关键词：辣椒品种(系)外植体培养基植株再生

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甘肃省自然科学基金(ZS991-A21-029-N)