何卓
- 作品数：42 被引量：152H指数：8
- 供职机构：湖南省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划湖南省重点学科建设项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 日本血吸虫核糖体蛋白S4基因的克隆、表达、纯化及免疫诊断价值的初步研究被引量：3
- 2010年
- 目的 体外重组日本血吸虫核糖体蛋白S4（SjRPS4）,并评价其在日本血吸虫病免疫诊断中的应用价值.方法 从日本血吸虫尾蚴cDNA文库获得了SjRPS4蛋白相关基因,将该段基因克隆入pQE30表达载体并转化到大肠杆菌M15中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导融合蛋白表达.融合蛋白经Ni2＋-NTA树脂柱进行亲和层析纯化,并通过十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定蛋白反应,通过Western blot和ELISA对其免疫原性进行鉴定.结果 成功构建了pQE30/SjRPS4重组菌.重组菌诱导培养后,SDS-PAGE电泳分析可见在相对分子质量约30×103处有SjRPS4融合蛋白的表达,经纯化获得纯度达90%以上的表达蛋白.Western blot检测结果表明该重组蛋白能被日本血吸虫病患者血清识别.用ELISA法检测疑似血吸虫病患者血清,敏感性为90.91%（70/77）,特异性为92.59%（25/27）,SjRPS4重组表达蛋白阳性率为67.30%（70/104）,与肺吸虫病患者血清无交叉反应.结论 成功克隆表达了SjRPS4蛋白,初步证实了SjRPS4在诊断血吸虫病中具有良好的应用价值.
- 高冬梅汪世平余路新何卓陈秀春
- 关键词：血吸虫重组蛋白质类免疫学试验
- 高效天然分子疫苗免疫猪血清筛选尾蚴抗原的结果分析被引量：8
- 2007年
- 采用日本血吸虫天然分子(Schistosoma japonicum immature egg ws-vaccine,SjiEw)免疫猪血清识别日本血吸虫可溶性尾蚴抗原(Soluble cercariae antigen,SCA),以筛选新的具有保护性免疫潜在价值的抗原分子。按常规方法制备日本血吸虫尾蚴抗原。家猪随机分组并分次免疫日本血吸虫天然分子疫苗,制备SjiEw疫苗免疫猪血清,通过蛋白免疫印迹技术分析其与SCA的免疫反应性。结果显示SDS-PAGE中SCA有16条主带。SjiEw疫苗免疫猪血清共筛选6种具免疫学活性的抗原分子,分子量分别为:50、56、66、68、70、85kDa。这些抗原分子的获得为以后的天然分子编码基因工程疫苗的制备奠定基础。
- 刘雪琴汪世平曾少华高冬梅何卓
- 关键词：日本血吸虫免疫反应性
- 日本血吸虫中国大陆株琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白的克隆与表达被引量：2
- 2006年
- 目的:克隆日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(SjSDISP)全长编码基因,并对所获基因在大肠杆菌中进行表达。方法:根据基因库中SjSDISP对应的EST(BU804141)以及日本血吸虫成虫cDNA文库载体λgt11多克隆位点邻近核苷酸序列设计引物,以日本血吸虫成虫cDNA文库为模板,采用锚式PCR对SjSDISP基因不完整的3′端和5′端进行扩增、测序,用电子软件拼接成全长cDNA,将其克隆到表达载体pGEX-4T-1上,经琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶消化、PCR和测序鉴定后,选择阳性克隆进行表达及Western印迹分析。结果:获得1071bp全长cDNA,其理论推导为编码278个氨基酸残基的蛋白质。SjSDISP基因在大肠杆菌BL21中获得良好表达。该融合表达产物相对分子质量约为56kD,且能被日本血吸虫成虫抗原免疫血清特异识别。结论:编码日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白全长cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达获得成功。
- 余俊龙汪世平何卓戴橄姜孝新曾少华肖晓芹周松华李文凯徐绍锐吕志跃彭先楚
- 关键词：日本血吸虫基因克隆基因表达
- 照射致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库被引量：5
- 2006年
- 目的 从日本血吸虫尾蚴cDNA文库中获得日本血吸虫新的蛋白编码基因，为防治血吸虫病提供候选疫苗和治疗药物靶点。方法 制备致弱尾蚴免疫兔血清作为探针筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库，挑取阳性克隆，测序并进行生物信息学分析。结果 共筛选出8个阳性克隆，长度分布于0．6～3．0kb。随机选取4个阳性克隆进行PCR扩增及测序，获得2个日本血吸虫新基因；整合酶相似蛋白编码基因和蛋白磷酸酶1催化亚单位编码基因。前者长度为636bp，含一个462bp完整开放阅读框（ORF）；后者1879bp，含一个984bp完整ORF。两者GenBank的登录号分别为：AY855919、AY879341。结论 致弱尾蚴免疫兔血清可作为筛选日本血吸虫新基因的有效探针；发现了2个日本血吸虫新基因。
- 汪世平曾少华吕志跃陈晓光李文凯姜孝新肖小芹徐绍锐周松华彭先楚何卓
- 关键词：日本血吸虫致弱尾蚴免疫血清CDNA文库
- 日本血吸虫生殖相关抗原31～32kDa分子的质谱分析与鉴定被引量：7
- 2008年
- 目的利用蛋白质组学技术分离、鉴定日本血吸虫天然分子31～32kDa抗原组分。方法收集感染后32d的日本血吸虫成虫,制备成虫蛋白,经一维电泳、固相pH梯度双向凝胶电泳分离,选取31～32kDa附近的蛋白点进行质谱分析鉴定,通过凝胶图像分析软件进行结果比较。结果二维电泳结果显示31～32kDa附近有13个蛋白点,经MALDI-TOF-MS鉴定及分析,发现3个蛋白分子分别与曼氏血吸虫Actine-2、日本血吸虫3-磷酸甘油脱氢酶、曼氏血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶有高度的同源性。结论31～32kDa组分中含有这3个蛋白点,它们与日本血吸虫31～32kDa天然分子中起保护性的有效分子密切相关。同时,它们的发现也为天然分子疫苗向基因工程疫苗的推进奠定了基础。
- 李林汪世平周帅锋胡少敏何卓高冬梅冯明钊
- 关键词：日本血吸虫蛋白质组学二维电泳质谱
- 湖南省2011-2013年疟疾疫情分析被引量：6
- 2014年
- 对2011-2013年湖南省疟疾病例的有关资料进行分析，2011-2013年该省共报告疟疾病例501例，年均发病率分别为0.2510/10万、0.2486/10万和0.3223/10万，3年平均发病率为0.2740/10万。501例病例均为输入性病例，其中长沙（44.3%，222/501）、邵阳（16.6%，83/501）、怀化（8.4%，42/501）和益阳（8.0%，40/501）。确诊病例占97.0%（486/501），临床诊断病例占3.0%（15/501）。其中，间日疟占41.3%（207/501）、恶性疟占47.9%（240/501）、三日疟占0.8%（4/501）、卵形疟占1.4%（7/501）、混合感染占6.6%（33/501）、未分型占2.0%（10/501）。40～49岁年龄组报告病例数最多，占40.3%（202/501）。职业以农民、工人、民工和干部职员为主。输入来源主要是非洲（47.7%，239/501）和东南亚地区（50.1%，251/501）。
- 庄世锋何卓李正祥王郭清吴文韬
- 关键词：疟疾流行病学输入性病例
- 实时荧光定量PCR法检测人乳头状瘤病毒的实验研究被引量：6
- 2008年
- 目的通过研究病变宫颈中人乳头状瘤病毒（HPV）16／18型的表达，探讨HPV16／18型病毒感染与宫颈病变发生发展之间的关系。方法结合病理切片诊断，以免疫组化作对照。运用实时荧光定量PCR技术检测病变宫颈中HPV16／18型DNA拷贝数，以及HPV16／18型E7基因mRNA表达量。结果慢性宫颈炎患者中HPV16／18型感染率低（7．4％）。宫颈管上皮内瘤样变（CIN）组HPV16型感染率较高为69．6％，宫颈癌患者中为72．7％。HPV16型DNA的拷贝数在宫颈上皮内瘤样变患者中与病理分级没有明显的相关性。但在宫颈癌患者中，病毒DNA的拷贝数明显升高，二者差异明显。CIN轻度（Ⅰ）、中度（Ⅱ）、高度（Ⅲ）组和宫颈癌患者中，HPV16 E7基因的表达率分别为0、37．5％、42．9％、63．6％。统计学分析表明，HPV16 E7 mRNA的拷贝数与病情呈明显的正相关性。结论感染者中主要以HPV16型为主，HPV18型较少。宫颈癌患者中HPV16 DNA拷贝数明显高于CINⅡ、Ⅲ组，HPV16型E7 mRNA在宫颈癌中表达率及表达量明显增加并与宫颈癌变呈正相关。实时荧光定量PCR适合临床宫颈病变病毒的筛查与检测。
- 汪世平贾政军何卓戴橄钟飞
- 关键词：荧光定量PCR人乳头状瘤病毒宫颈癌
- 黑胸大蠊不同发育阶段可溶性抗原特征分析被引量：7
- 2004年
- 为了对黑胸大蠊的不同发育阶段蛋白质抗原进行免疫生化特性分析 ,采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS -PAGE)对黑胸大蠊不同发育阶段可溶性蛋白质组分进行分离鉴定通过酶联免疫印迹 (ELIB)技术分析不同发育阶段抗原的免疫学特性。四种抗原蛋白经SDS -PAGE后银染色 ,均得到清晰的蛋白显色带。卵抗原、若虫抗原、雄成虫抗原、雌成虫抗原分别可见 13、2 8、2 6和 4 1条蛋白区带 ,其中主带分别为 2、10、10、13条 ,分子量大多位于 10kDa - 97kDa范围。具有免疫原性的蛋白质大多分布在 4 3kDa以上分子量范围 ,四种抗原组分相互之间有交叉抗原的存在。结果表明不同发育阶段黑胸大蠊的蛋白质组分从卵 -若虫 -成虫出现次第增多现象并趋于复杂化 ,这对研究黑胸大蠊的发育生物学特征具有一定的潜在意义。
- 徐绍锐汪世平吴仕筠吕志跃李文凯彭先楚何卓
- 关键词：黑胸大蠊可溶性抗原
- 1例输血性恶性疟病例实验室诊断与流行病学分析被引量：3
- 2019年
- 目的通过对1例输血性恶性疟病例实验室诊断和流行病学分析,为当地输入疟疾防治提供科学依据。方法收集和分析患者病历资料、流行病学资料以及供血者流行病资料;对患者血样进行疟原虫镜检、疟疾快速试纸条(RDT)和巢式PCR方法检测。结果患者无外出史、无疟疾既往病史、有输血史,外周血涂片查见恶性疟原虫,RDT为单一恶性疟阳性,巢式PCR为恶性疟阳性;随访给患者供血者,有境外疟疾流行区外出史和疟疾既往病史,血样RDT为单一恶性疟原虫阳性,但疟原虫镜检阴性。结论该患者为输血引起的恶性疟病例,建议相关部门加强献血者献血时疟疾筛查工作,以避免类似因输血引起的疟疾病例发生。
- 朱韩武何卓黄友军周虹谭徽李正祥王艳琴
- 关键词：恶性疟原虫输血
- 日本血吸虫核糖体蛋白SjRPS4、SjRPL7 DNA疫苗对小鼠免疫保护作用研究被引量：5
- 2010年
- 目的研究日本血吸虫核糖体蛋白SjRPS4、SjRPL7DNA疫苗对小鼠免疫保护作用。方法大量制备pcD-NA3.0/SjRPS4和pcDNA3.0/SjRPL7质粒DNA疫苗,昆明小鼠40只,随机均分为A、B、C和D组,A组为生理盐水(NS)组,每次肌肉注射100μL生理盐水;B组每只小鼠的股四头肌注射100μgpcDNA3.0裸质粒DNA;C组为pcDNA3.0/SjRPS4真核重组质粒组,每次肌肉注射质粒100μg/100μL;D组为pcDNA3.0/SjRPL7真核重组质粒组,每次肌肉注射质粒100μg/100μL。每隔2w同量加强免疫1次,共3次。末次免疫后第2w测定免疫各组血清特异性抗体效价后,经小鼠腹部皮肤人工感染20±1条日本血吸虫尾蚴。感染后第42d处死小鼠,计算减虫率和减卵率。结果与NS对照组比较,pcDNA3.0/SjRPS4和pcDNA3.0/SjRPL7免疫组小鼠均获得了较显著的减虫率、肝减卵率、肠减卵率、每雌子宫减卵率。统计学处理,均有显著性差异。结论pcDNA3.0/SjRPS4和pcDNA3.0/SjRPL7DNA疫苗对小鼠均有较强的免疫保护效果。
- 汪世平高冬梅何卓余路新陈秀春
- 关键词：日本血吸虫DNA疫苗免疫保护
