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徐正中: 作品数：19 被引量：106H指数：6; 供职机构：扬州大学生物科学与技术学院更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学文化科学生物学更多>>

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牛γ-干扰素ELISA检测方法的建立与初步应用被引量：16: 2010年; 以纯化的rHis-BoIFN-γ制备兔多抗血清,辛酸—硫酸铵两步法对体内诱生的抗rBoIFN-γ单抗腹水进行纯化,用美洲商陆素(Pokeweed mitogen,PWM)刺激奶牛全血产生的分泌性天然BoIFN-γ筛选出与之反应最佳的单抗5E11。将单抗5E11以40μg/mL浓度包被,与1∶3 000倍稀释的兔抗rHis-BoIFN-γ多抗血清(13.8μg/mL)配对,以1∶6 000稀释的商品化酶标羊抗兔IgG为指示抗体,建立了BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法,该方法可以检出2.56 U/100μL(30.5 pg/100μL)的rHis-BoIFN-γ、8U/100μL的rBac-BoIFN-γ和1U/100μL的分泌性天然BoIFN-γ。以商品化试剂盒作为平行对照,将获得的奶牛临床检测血浆样品使用BoIFN-γ抗原捕获ELISA法进行检测,结果显示两种方法检测符合率达到83.9%。本研究建立的BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法可有效检测分泌性IFN-γ,为进一步开发BoIFN-γELISA检测试剂盒奠定了基础。; 陈祥牛中伟徐正中孟闯孙林黄金林潘志明焦新安; 关键词：Γ-干扰素单克隆抗体

γ-干扰素试验和皮试变态反应对检测奶牛结核病的比较被引量：29: 2011年; 目的评价γ-干扰素试验、单纯颈部皮试变态反应和比较皮试变态反应检测在牛结核病检疫过程中的效果。方法在牛结核病检疫过程中,953头奶牛同时进行γ-干扰素试验和单纯颈部皮试变态反应检测,其中的190头奶牛进行了比较变态反应试验。结果在同步进行γ-干扰素试验和单纯颈部皮试变态反应检测的953头奶牛中,两者的阳性符合数为147头,阳性符合率为63.8%(294/461),两者的阴性符合数为639头,阴性符合率为88.4%(1 278/1 445);在进行比较皮试变态反应的190头奶牛中,γ-干扰素试验与比较皮试变态反应的阳性符合数为3头,阳性符合率为75%(6/8),阴性符合数为185头,阴性符合率为99.5%(370/372);单纯颈部皮试变态反应与比较皮试变态反应的阳性符合数为4头,阳性符合率为72.7%(8/11),阴性符合数为183头,阴性符合率为99.2%(366/369)。结论单纯颈部皮试变态反应有较高的检出率;同单纯颈部皮试变态反应相比,比较皮试变态反应有较好的特异性;γ-干扰素试验在保持较高灵敏度的同时,具有较好的特异性。; 陈祥徐正中时振华范峰蒋锁俊孟闯黄根成单锋丽焦新安; 关键词：牛结核

DNA免疫法制备抗鸡IL-4单克隆抗体: 2017年; 为建立有效检测鸡IL-4(ChIL-4)的生物学方法,将重组真核表达质粒pVAX1-ChIL-4作为免疫抗原,肌肉注射法免疫6周龄BALB/c小鼠,免疫的间隔时间为4周,共免疫5次;于加强免疫3次后,取免疫鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合。以His-ChIL-4为检测抗原,建立间接ELISA筛选杂交瘤细胞株;采用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞株进行亚克隆,体内诱生腹水法大量制备腹水单抗;采用ELISA、Western blot法分析mAbs的特异性。结果本研究共获得3株抗ChIL-4mAbs:1C11、5C1和3E10,其亚类分别为IgM、IgM和IgG2a,腹水效价为(1.6~6.4)×104。间接ELISA及Western blot结果显示,所获得的mAbs均只识别重组ChIL-4,而不能识别其他无关抗原,表明所获得的3株mAbs均特异性针对ChIL-4。该mAbs的获得为建立检测ChIL-4的生物学方法及进一步研究ChIL-4的生物学功能提供了有效的生物材料。; 戴华闫加庆张海霞徐正中陈祥焦新安; 关键词：ELISA 单克隆抗体

梅花鹿γ干扰素双单抗夹心ELISA方法的初步建立被引量：3: 2013年; 为利用抗牛γ干扰素(BoIFN-γ)特异性单克隆抗体(MAb)建立检测梅花鹿γ干扰素(CerIFN-γ)的双抗体夹心ELISA检测方法,本研究通过RT-PCR方法从双阳型梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA中扩增出CerIFN-γcDNA,通过原核表达系统表达重组CerIFN-γ蛋白(rHis-CerIFN-γ);通过间接ELISA方法评价其与抗BoIFN-γMAb的反应性,筛选出与之反应最佳的两株MAb建立双抗体夹心ELISA检测方法。基因序列比对显示CerIFN-γ(JQ408441)与BoIFN-γ的同源性为95.6%,氨基酸序列的同源性为91.6%;SDS-PAGE检测结果显示CerIFN-γ在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效可溶性表达,大小为23 ku;间接ELISA结果显示42株MAb中有15株与rHis-CerIFN-γ反应性较好,其中1C12和5E11两株抗体结合活性最高;采用MAb 1C12为捕获抗体,以生物素标记的MAb 5E11为检测抗体建立的用于检测CerIFN-γ的双抗体夹心ELISA方法可检出3.05 ng/100μL的rHis-CerIFN-γ。本研究所建立的检测CerIFN-γ双抗体夹心ELISA方法,为进一步研究CerIFN-γ及相关疾病提供了实验手段。; 解晓莉徐正中孟闯单锋丽单法陈祥焦新安; 关键词：单克隆抗体夹心ELISA

沙门菌逃逸宿主天然免疫应答机制的研究进展被引量：4: 2020年; 沙门菌是重要的食源性病原菌,其流行严重威胁着全球公共卫生安全。天然免疫应答对于宿主抵御沙门菌的感染具有重要的作用,但是沙门菌已演化出一系列逃逸宿主天然免疫应答的策略,使其在宿主体内定植,并得以持续性感染。本文对由受体(TLRs、NLRs和RIPs)、细胞因子(IL-22和IL-4)和哺乳动物西罗莫司靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路介导的沙门菌逃逸天然免疫应答的机制研究进展进行阐述,期望为沙门菌的预防与治疗提供新的研究思路。; 徐诺周帮月史艺潘兴元秦涛徐正中阴银燕; 关键词：沙门菌免疫逃逸 TOLL样受体

牛γ干扰素的表达及其抗病毒活性测定: 通过RT-PCR从经ConA刺激诱导的奶牛脾脏淋巴细胞总RNA中扩增出牛γ-干扰素(BoIFN-γ)cDNA，克隆到真核载体pVAXl中，测序结果显示pVAXl中的插入序列BoIFN-γ基因与已报道序列一致。用重组质粒p...; 徐正中陈祥孟闯孙林黄金林潘志明耿士忠焦新安; 关键词：基因表达抗病毒活性重组质粒

生物被膜形成相关基因对鼠伤寒沙门菌耐药性的影响被引量：3: 2020年; 目的检测鼠伤寒沙门菌S025△rpoN、△rpoS、△csgA和△bcsA缺失株生物被膜形成能力和对药物敏感性的差异,研究生物被膜及其成分对细菌耐药性的影响。方法运用试管法检测生物被膜,药敏试验、最小抑菌浓度(MIC)法和最小杀菌浓度(MBC)法检测细菌对药物的敏感性。结果与野生株相比,△rpoN缺失株生物被膜形成能力增强,但对抗生素的敏感性没有发生改变,△rpoS和△csgA缺失株丧失生物被膜形成能力,△bcsA缺失株生物被膜形成能力下降,△rpoS、△csgA和△bcsA缺失株对头孢噻肟、美福仙、四环素、强力霉素和庆大霉素的敏感性提高,且△csgA缺失株抑菌圈直径大于△bcsA缺失株,表明生物被膜形成提高了细菌的耐药性。庆大霉素MBC结果显示,野生株和△rpoN为6.25μg/ml,而△rpoS、△csgA和△bcsA分别为1.56μg/ml、1.56μg/ml和3.125μg/ml,表明生物被膜形成提高抗生素的杀菌浓度。结论沙门菌形成生物被膜能提高细菌的耐药性,且卷曲菌毛的作用更为重要。; 阴银燕史艺秦涛何凯明徐诺朱中天冯政王敏殷立晗陈素娟徐正中彭大新; 关键词：鼠伤寒沙门菌生物被膜耐药性纤维素

结核分枝杆菌MPT83的表达、免疫特性分析及其在牛结核病检测中的应用: 目的原核表达并纯化结核分枝杆菌MPT83蛋白，并分析其细胞免疫学特性，同时建立间接ELISA方法用于牛结核病临床检测，评价其应用潜能。方法构建MPT83蛋白的重组表达菌，诱导纯化并鉴定产物，FACS和ELISPOT方法分...; 孟闯陈祥时振华徐正中文志发潘志明焦新安; 关键词：牛结核病分枝杆菌原核表达细胞免疫学血清学检测

重组牛白细胞介素4的原核表达及其单克隆抗体研制被引量：7: 2011年; 目的:原核表达重组牛白细胞介素4(rBoIL-4)并制备针对抗rBoIL-4的单克隆抗体(mAb)。方法:通过PCR从重组质粒pSP73-BoIL-4中扩增BoIFN-γ基因,分别克隆入表达载体pGEX-6p-1和pET-30a(+)中,构建重组菌并对其进行诱导表达、纯化和鉴定。以纯化的融合蛋白rHis-BoIL-4为免疫原,用纯化的rGST-BoIL-4为筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术,研制抗rBoIL-4的mAb。结果:获得表达BoIL-4基因的重组菌BL21(pGEX-6p-1-BoIL-4)和BL21(DE3)(pET-BoIL-4),重组蛋白相对分子质量(Mr)的大小分别为39 000和19 000,且以包涵体的形式存在。获得7株可稳定分泌抗rBoIL-4 mAb的细胞株,命名为2B8、4A10、5D6、5D8、7G10、8B7和10F8,这些mAb腹水的效价依次为5 000、160 000、10 000、640 000、5 000、40 000和40 000,mAb亚类均为IgG1。Dot-ELISA的结果表明,7株mAb只与融合蛋白rHis-BoIL-4和rGST-BoIL-4起反应,而不与其他重组细胞因子和对照细菌起反应,显示出良好的特异性。Western blot试验显示,7株mAb均能与相应的融合蛋白发生反应,出现特异性条带。同时7株mAb均能与BoIL-4的标准品起反应。结论:7株抗rBoIL-4的mAb均具有高度的特异性,为进一步研究其在牛的免疫调控、牛疫病的致病机制及其诊断中的应用奠定了基础。; 陈祥张成全徐正中孟闯黄金林潘志明焦新安; 关键词：原核表达单克隆抗体

重组黑白花奶牛γ-干扰素在大肠杆菌中的原核表达与鉴定: 2014年; 根据黑白花奶牛γ-干扰素(BovIFN-γ)基因的序列,通过RT-PCR扩增出BovIFN-γcDNA,并将其定向插入原核表达质粒pET-30a(+)和pGEX-6P-1,经DNA测序后,分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,分别表达出大小在23和43 ku左右的融合蛋白。通过对诱导剂的浓度、诱导起始时间、诱导持续时间的筛选,对表达条件进行了优化,BL21(DE3)/pET-30a(+)-BovIFN-γ与BL21/pGEX-6P-1-BovIFN-γ的融合蛋白的相对表达量最高时可分别达到菌体总蛋白的60%和45%左右。使用纯化的融合蛋白rHis-BovIFN-γ和rGST-BovIFN-γ进行细胞病变抑制试验,证实表达产物具有较高抗病毒感染活性,在牛肾细胞(MDBK)上抑制水疱性口炎病毒的活性分别为2.15×107和1.21×105U·mg-1。; 范锋徐正中倪谷音毛爱民杨卫冲陈祥; 关键词：奶牛原核表达

徐正中

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