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李涛: 作品数：79 被引量：56H指数：5; 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市自然科学基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>

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利用TAT多肽增强腺病毒对细胞感染效率的研究被引量：1: 2005年; 蛋白转导多肽本身或携带生物大分子能以一种不明机制的方式高效地穿过真核细胞质膜并且几乎没有组织选择性。这为生物药物研究、基因治疗等领域带来了新的希望。最近有研究表明:来源于HIV-1的TAT蛋白的蛋白转导结构域多肽可以显著地提高重组腺病毒感染细胞和实验动物的效率。在对。HeLa且和Vero-E62种具有不同病毒易感性的细胞进行重组腺病毒感染实验时发现TAT多肽可以明显地提高重组腺病毒对HeLa细胞的感染及在细胞中外源报道基因的表达,但是对Vero-E6细胞却没有效果,表明TAT多肽增强重组腺病毒的感染与靶细胞类型有关,而并不像转导现象那样没有组织差异。这为蛋白转导技术在病毒载体中的应用提供了参考,但其中涉及的蛋白转导的机制有待进一步实验研究。; 党颖朱旭东王应雄李涛王宇新黄培堂; 关键词：蛋白转导 TAT蛋白细胞质膜感染细胞报道基因真核

细胞质膜蛋白质组学被引量：3: 2006年; 随着基于质谱的大规模蛋白质鉴定技术的建立,蛋白质组学得到迅速发展。同时由于质膜在细胞生命活动中的重要作用,质膜蛋白质组学逐渐兴起,并发展成为蛋白质组学研究中的重要组成部分。但由于膜蛋白尤其是内在膜蛋白的强疏水性、低丰度,造成蛋白质提取、分离和鉴定相对困难,使质膜蛋白质组成为蛋白质组研究中的一个技术难点。; 李涛姜颖贺福初; 关键词：质膜蛋白质组

细胞通路调控分子在作为药物靶点及诊断EBOV感染中的应用: 本发明公开了细胞通路调控分子在作为药物靶点及诊断EBOV感染中的应用。本发明所公开的细胞通路调控分子为TRAF2、TP53、CASP9、RIPK3、CASP7、CIAPIN1、TNF、BAX、CASP6、TYRO3、MS...; 王慧李涛刘雄刘坤宁年智

蒽贝素或蒽贝素类化合物的一种新用途: 本发明公开了一种蒽贝素或蒽贝素类化合物的一种新用途。所述新用途为蒽贝素或蒽贝素类化合物在制备预防和/或治疗梭菌属细菌毒素中毒的药物中的应用。所述蒽贝素或蒽贝素类化合物对梭菌属神经毒素具有更广范围的抑制和拮抗作用，避免了采...; 王慧李涛卢晓雪刘坤

肠出血性大肠杆菌毒力相关基因突变株的构建: 2012年; 目的:利用Red重组系统敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7的毒力基因espA、espB、espD,构建3株突变株。方法:以肠出血性大肠杆菌O157∶H7为模板,PCR扩增基因两翼的同源序列;将PCR产物插入pEASY-T1载体并测序,将测序正确的上、下游同源序列分步酶切,构建于pUC19-kan质粒上,经PCR获得两端同源序列中间嵌合卡那霉素抗性基因标记的线性片段,利用质粒pKD46介导的重组技术,敲除espA、espB、espD基因,之后转入pCP20质粒以去除抗性标记,最后测定突变株及野生菌株的生长曲线。结果:敲除了肠出血性大肠杆菌O157∶H7的毒力基因espA、es pB、espD,获得3株突变株,突变株与野生株的生长曲线相近。结论:为进一步研究espA、espB、espD基因在肠出血性大肠杆菌O157∶H7致病过程中的作用奠定了基础。; 姜楠王琴李涛侯晓军肖乐房华丽罗森王慧; 关键词：RED重组系统

人外周血单核细胞的分离和电穿孔法转染被引量：6: 2010年; 目的:建立分离纯化人外周血单核细胞及转染的有效方法。方法:应用基于HISTOPAQUE的密度梯度离心及抗体标记纯化的方法分离单核细胞,并以电穿孔技术转染绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)小干扰RNA。结果:基于外周血单核细胞的表面标志分子CD14的流式细胞分析表明得到了高纯度(89.95%)的外周血单核细胞;GFP荧光照片显示GFP表达质粒的转染效率为60%～70%;免疫印迹显示TRAF6的表达抑制(>90%)下调了脂多糖(LPS)对JNK的激活,说明通过电穿孔技术有效递送了TRAF6小干扰RNA,表明单核细胞若缺少TRAF6将抑制LPS-TLR4信号通路的激活。结论:建立了一种高效的从人外周血中分离原代单核细胞的方法,且应用基于NucleoFectorⅡ的电穿孔技术实现了对此原代单核细胞的高效转染,为进一步外周血单核细胞的相关功能研究奠定了方法学基础。; 李涛满江红巩伟丽靳宝锋; 关键词：外周血单核细胞电穿孔转染

埃博拉病毒感染血液中的特征miRNA与应用: 本发明公开了埃博拉病毒感染血液中的特征miRNA与应用。本发明公开的与EBOV病毒感染相关的血液中miRNA为hsa‑miR‑151a‑5p、hsa‑miR‑744‑5p、hsa‑miR‑423‑5p、hsa‑miR‑3...; 王慧曹务春李涛刘雄江佳富户义邓永强刘坤宁年智

B型肉毒毒素轻链的高效制备及活性鉴定被引量：3: 2018年; 目的:在大肠杆菌中高效表达B型肉毒毒素轻链(BoNT/BLC)并纯化,研究其生物学活性。方法:根据报道的BoNT/B LC基因序列设计引物,从肉毒梭菌中扩增BoNT/BLC基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosetta感受态细胞,构建重组大肠杆菌pET-22b BoNT/BLC/BL21(DE3)Rosetta,在20℃条件下用IPTG诱导目的蛋白表达,表达产物经His Trap FF柱纯化,用SDS-PAGE对目的蛋白进行鉴定,并利用相应底物对纯化产物进行生物活性分析。结果与结论:构建了重组大肠杆菌pET-22b BoNT/BLC/BL21(DE3)Rosetta,BoNT/BLC表达量达到了细菌总蛋白的30%左右,通过一步亲和纯化目的蛋白后经SDS-PAGE检测其纯度在95%以上,制备的重组LC的酶活略高于B型肉毒毒素全毒素,可作为试剂用于BoNT/BLC抑制剂高通量体外检测方法的研究。; 罗森陈芳红李涛王慧; 关键词：肉毒毒素原核表达

逆转录病毒感染结合流式细胞分选方法构建稳定过表达CUEDC2的MCF-10A细胞系被引量：4: 2012年; CUEDC2(CUE domain containing protein 2)是本实验室发现的功能未知蛋白质。已有研究证明CUEDC2通过抑制孕激素受体PR影响乳腺癌细胞的生长,同时CUEDC2的高表达能够降解雌激素受体ER而导致乳腺癌内分泌治疗耐药。为了深入研究CUEDC2在乳腺癌中的功能,构建了稳定过表达CUEDC2的MCF-10A细胞系。利用逆转录病毒将非融合形式的绿色荧光蛋白质GFP和CUEDC2基因稳定整合至靶细胞的基因组中,经过流式分选获得GFP阳性细胞,即为稳定表达CUEDC2的细胞株。上述方法高效快捷,极大提高了稳定细胞株的构建效率。同时该稳定细胞株的建立为CUEDC2的功能研究提供了必要的工具。; 陈媛巩伟丽韩秋影张飒李涛; 关键词：CUEDC2 稳定细胞系

EV71与CB3病毒VP1融合蛋白的构建表达与抗原性初步评价: 2013年; 目的构建pET-22b-ECVP1表达载体,在大肠杆菌中诱导表达肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇B3型(CB3)病毒VP1融合蛋白(ECVP1),并鉴定其抗原性。方法利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分别从EV71与CB3病毒基因组中扩增得到外壳蛋白VP1基因,经重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法拼接构建重组融合蛋白基因(ecvp1),将该片段连接到pET-22b表达载体上,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达融合蛋白,经Western blot鉴定其抗原性。结果pET-22b-ECVP1表达载体构建成功,融合蛋白相对分子量约为65 ku,Western blot分析表明,该融合蛋白能被抗EV71及抗CB3抗体特异识别。结论成功构建pET-22b-ECVP1表达质粒并诱导ECVP1融合蛋白表达,且融合蛋白具有良好的抗原性。; 房华丽王琴罗森高翔屠伟田仁茂刘雄李涛王慧; 关键词：肠道病毒71型柯萨奇B3病毒融合蛋白

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