刘浩
- 作品数：129 被引量：122H指数：6
- 供职机构：天津科技大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学农业科学化学工程更多>>
- 一种降低L-苹果酸发酵过程中副产物琥珀酸的基因工程菌株、方法及应用
- 本发明属于生物工程技术领域，公开了一株降低L‑苹果酸发酵过程中副产物琥珀酸的黑曲霉工程菌株，所述黑曲霉工程菌株是敲除了产L‑苹果酸的黑曲霉菌株中特定基因ctp6的黑曲霉工程菌株。本发明克服了现有技术中的不足，现有的利用黑...
- 刘浩 白春芳 刘蛟
- 一种生产衣康酸的黑曲霉菌株、方法及应用
- 本发明公开了一种生产衣康酸的黑曲霉(Aspergillusniger)菌株，所述菌株是在出发黑曲霉中同时或单独强化表达顺乌头酸脱羧酶基因cadA、线粒体三羧酸转运蛋白编码基因mttA和一个主要促进者超家族转运蛋白编码基因...
- 刘浩 王亚奇 曹威 林韦秦
- 文献传递
- 基于转录组学挖掘兽疫链球菌内源表达元件及高产透明质酸应用
- 2024年
- 【目的】构建兽疫链球菌内源性表达元件文库,并探究其在提高透明质酸产量中的应用。【方法】通过对兽疫链球菌发酵指数期和平台期进行转录组测序分析,初步筛选32种高、中、低3种强度的启动子与RBS组合(表达元件PR);进一步利用绿色荧光蛋白基因转录水平及荧光强度来验证PR元件的强度;最后,利用筛选到的较强元件PR31过表达透明质酸合成关键基因hasA,hasB,hasC,hasD,hasE,并采用2 L发酵罐评价强表达元件在提高透明质酸产量的效果。【结果】上述基因的相对转录水平分别提高至原来的8.17、7.32、3.72、39.48、9倍。其中,过表达hasA及hasD后,透明质酸产量相对于野生型分别提高了43%和31%,达到5.654 g/L和5.283 g/L。【结论】成功构建了兽疫链球菌内源表达元件文库,可用于透明质酸合成途径强化及竞争途径弱化等代谢工程改造。
- 赵锐狄靖宜张广通刘浩高伟霞
- 关键词：兽疫链球菌转录组测序启动子透明质酸
- 考虑碳流约束的电力系统能碳安全域模型与计算方法被引量：3
- 2024年
- 针对当前电力系统碳减排任务与安全稳定运行需求,研究电力系统低碳安全运行技术。现有的能量流安全域模型使电力系统安全监视与控制更加科学有效,但忽略了系统运行过程中可能存在的“高碳”风险。文中提出了一种考虑碳流约束的电力系统能碳耦合安全域(简称能碳安全域)模型与计算方法,旨在保证系统安全性的同时减排提效。为完整刻画电力系统的低碳运行能力极限,分别从负荷端和源端角度提出了考虑碳流约束的系统最大供电能力曲线及最大消纳能力曲线模型。基于系统最大供电能力工作点,提出了能碳安全边界仿真拟合计算方法,实现了能碳安全域的降维观测。最后,结合算例验证了所提模型的有效性。
- 刘浩王丹王丹肖峻贾宏杰何承瑜
- 关键词：安全域
- 面向标签恢复的子集划分迭代投影集成被引量：1
- 2020年
- 在图像特征提取中,样本标签并非完全真实有效,可能导致图像归类框架的分类精度大幅下降,而现有标签恢复算法面临含噪样本难以高效再利用的瓶颈问题。为此,本文提出一种基于子集划分迭代投影集成的标签恢复算法。该算法首先随机多次地提取小规模子集信息,然后综合主成分分析、邻域图正则化及K-近邻算法等技术进行样本图像的可靠降维与迭代投影集成,最后遵循多数投票原则实现标签复原。本文选取两大代表性的人脸数据库,对多种标签恢复算法进行了不同指标下的大量对比分析。实验结果证明,本文算法能够有效地校正样本的含噪标签,在同一图像归类框架下针对Yale B与AR数据库分别使分类精度提升了16.9%与8.1%。相较于目前最好的标签恢复算法,本文子集划分迭代投影集成算法可以提升4.3%~4.7%的分类精度,且在确保样本数据完整性的同时具备了一定的可扩展性。
- 应晓清刘浩刘浩杨正成
- 关键词：特征提取
- 一种用于生产大分子量透明质酸的遗传重组质粒及工程菌与应用
- 本发明涉及一种用于生产大分子量透明质酸的遗传重组质粒，所述遗传重组质粒是将CovR基因或CovS基因和长度为221bp的Ppgk启动子插入pSET4s::oriB.s载体的多克隆位点处，构建成功。本发明工程菌的HA产量明...
- 刘浩谢周杰刘杰郑春阳曹威
- 文献传递
- 制备高分子量透明质酸的方法及工程菌
- 本发明涉及一种制备高分子量透明质酸的方法及工程菌，通过敲除兽疫链球菌（Streptococcus zooepidemicus)ATCC39920基因组中编码透明质酸裂解酶基因(hylb)，本发明构建了透明质酸裂解酶基因(...
- 刘浩王震
- 文献传递
- 一种链球菌基因诱导表达系统及其应用
- 本发明涉及一种链球菌基因诱导表达系统，所述系统由基因xylR和人工设计的启动子O2p组成。本基因表达系统在不添加木糖的培养基中背景表达极低，而在添加木糖的培养基中实现基因的高强度表达，因此该基因诱导表达系统在蛋白表达、基...
- 刘浩谢周杰于杰曹威
- 文献传递
- 毕赤酵母液滴微流控高通量筛选方法的建立与应用被引量：7
- 2019年
- 巴斯德毕赤酵母是当前应用最为方便和广泛的外源蛋白表达系统之一,为了进一步提高其表达外源蛋白的能力,文中建立了基于液滴微流控的毕赤酵母高通量筛选方法,并以木聚糖酶融合荧光蛋白为例,筛选获得木聚糖酶表达和分泌能力提高的突变株。通过PCR扩增得到木聚糖酶xyn5基因和绿色荧光蛋白gfp基因融合片段,并克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中构建出木聚糖酶融合绿色荧光蛋白的质粒pPIC9K-xyn5-gfp,电转化至毕赤酵母GS115中得到表达木聚糖酶和绿色荧光蛋白的毕赤酵母SG菌株。该菌株经过常压室温等离子体诱变后进行单细胞液滴包埋,液滴培养24h后进行微流控筛选,获得高表达木聚糖酶的突变菌株,进而用于下一轮的诱变突变库构建和筛选。以此类推,经过5轮液滴微流控筛选,获得一株高产菌株SG-m5,其木聚糖酶活为149.17U/mg,较出发菌株提升300%,分泌外源蛋白的能力较出发菌株提高160%。文中建立的毕赤酵母单细胞液滴微流控高通量筛选方法能达到每小时10万菌株的筛选通量,筛选百万级别的菌株库仅需10h,消耗荧光试剂体积100μL,对比传统的微孔板筛选方法降低试剂成本近百万倍,为高效、低成本筛选获得表达和分泌外源蛋白能力提高的毕赤酵母提供了一条新途径。
- 吕彤涂然袁会领刘浩王钦宏
- 关键词：毕赤酵母高通量筛选单细胞蛋白分泌
- 兽疫链球菌中与透明质酸合成相关新基因的高通量筛选及克隆被引量：1
- 2015年
- 【目的】兽疫链球菌(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus)中透明质酸主要的生物合成途径和相关基因已经被研究得比较透彻,探究一种挖掘与透明质酸合成相关新基因的策略。【方法】利用自杀质粒p SET4s::sac B在宿主基因组中的随机整合作用,筛选具有表型差异突变菌株构建突变体库,进一步利用连接介导PCR(Ligation mediated PCR,LM-PCR)方法和全基因组重测序,检测质粒整合位点,通过基因无痕敲除和回补实验验证插入位点。【结果】构建了包含150株具有表型差异突变株的突变体库;以荚膜合成能力缺失的1号突变株(M1)作为基础研究对象,检测到自杀质粒整合到基因组458 960位点上,破坏了编码塔格糖-6-磷酸激酶的lac C基因;无痕敲除lac C基因得到Δlac C,表型分析发现Δlac C表现为粘性荚膜特性;进一步全基因组重测序发现,除了lac C基因位点存在插入突变,206 613位点存在碱基G缺失,导致编码透明质酸合成酶的has A基因发生移码突变,且回补has A基因后,M1恢复粘性荚膜合成能力。【结论】M1突变株粘性荚膜合成能力的缺失由has A基因功能缺失引起,与lac C基因功能缺失无关。初步建立了兽疫链球菌中高通量筛选与透明质酸合成相关新基因的策略,为今后挖掘新基因奠定了基础。
- 毕亚丽王震王璐刘浩
- 关键词：透明质酸兽疫链球菌突变体库整合位点
