卢健
- 作品数：63 被引量：182H指数：7
- 供职机构：上海交通大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 应用可调控Notch1干扰载体诱导HeLa细胞增殖抑制被引量：2
- 2007年
- 背景与目的:Notch信号转导途径与细胞增殖与分化的调控密切相关,它的功能失调在肿瘤细胞的增殖分化中发挥着重要的作用。本研究构建了针对Notch1的可调控RNA干扰载体,并从分子水平及细胞水平上研究其对HeLa细胞的影响。方法:利用受CRE重组调控的RNA干扰载体pSico和pSicoR构建针对GAPDH和Notch1的shRNA表达载体,以pBS185-CRE作为CRE蛋白的表达载体,将HeLa细胞分为pSico、pSico/CRE、pSicoR和pSicoR/CRE4组,分别转染相应质粒,RT-PCR和Westernblot法检测干扰效率,CBF-1荧光素酶报告载体检测细胞内活性Notch信号水平,MTS实验检测细胞增殖状态。结果:各组细胞在转染重组质粒pSico(R)-GAPDH和pSico(R)-Notch1后,EGFP的表达均表现出明显的CRE依赖性;RT-PCR和Westernblot实验显示,pSico(R)-Notch1载体能在CRE蛋白的调控下抑制Notch1基因的表达,CBF-1荧光素酶报告载体实验可见,Notch1的干扰作用使细胞内Notch信号水平下降;MTS实验可见Notch1干扰引起的HeLa细胞增殖抑制。结论:由可调控RNA干扰载体介导的CRE依赖性Notch1表达降低能降低细胞内Notch信号水平并抑制HeLa细胞增殖。
- 俞海黄盛林赵小平卢健钱关祥葛盛芳
- 关键词：NOTCHHELA细胞CRE
- 基因治疗中若干关键问题的基础研究
- 钱关祥戴冰冰卢健李锋应磊张萍梅文瀚徐荣婷胡亮王克敏
- 该项目是针对基因治疗中存在的一些关键问题的基础研究工作，从目的基因的克隆，基因表达的靶向性以及基因表达水平的提高多个方面进行了研究。主要用于基因治疗中进一步的基础以及临床研究工作。主要是：用于提高肿瘤基因治疗中的目的基因...
- 关键词：
- 关键词：基因治疗靶向表达
- PIK3CA基因突变与癌症的关系被引量：2
- 2006年
- 研究发现约30%的人类实体瘤存在PIK3CA基因的突变,导致PI3K信号途径在不同水平发生调控异常。功能和遗传学研究显示,PIK3CA是一个致癌基因,在肿瘤细胞中,其激酶活性增强,能持续刺激下游AKT,使细胞不依赖生长因子增殖,增加细胞侵袭和转移能力。因此,PIK3CA基因在肿瘤发生发展中起重要作用,是较好的干预治疗的靶点。
- 王红洁蔡蓉卢健
- 关键词：基因突变癌基因蛋白质酪氨酸磷酸酶
- 转化生长因子β1对肾小管上皮细胞中结缔组织生长因子基因启动子活性的影响被引量：6
- 2005年
- 目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对人近端肾小管上皮细胞系HK-2中结缔组织生长因子(CTGF)基因启动子活性的调控作用,以及丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)途径对该生长因子作用的影响。方法构建含有人类CTGF基因启动子的报告基因pCTGF-luc,将其瞬时转染HK-2细胞。通过检测荧光素酶的活性观察TGF-β1和MAPK途径抑制剂对CTGF基因启动子活性的影响。结果TGF-β1以剂量和时间依赖方式上调HK-2中CTGF基因启动子的活性。最佳刺激浓度是5ng/ml,最佳刺激时间为12h,荧光素酶相对活性分别为对照组的1.82倍和2.10倍(P<0.05)。应用PD98059、SB203580和SP600125分别特异性抑制MAPK途径的胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、蛋白激酶p38(p38MAPK)和c-Jun-氨基末端激酶(JNK)通路,对TGF-β1上调CTGF启动子活性的作用有不同影响。PD98059显著增加HK-2中pCTGF-luc的基础活性,并在一定浓度范围内(0.5-10μmol/L)促进TGF-β1的上调作用。SB203580对pCTFGF-luc基础活性无影响,但以剂量依赖方式显著抑制TGF-β1的激活效应。而SP600125对基础状态和TGF-β1刺激下CTGF基因启动子活性无影响。结论TGF-β1以剂量和时间依赖方式上调HK-2中CTGF基因启动子活性,在转录水平调节CTGF表达。MAPK途径的ERK和p38MAPK通路可影响TGF-β1的这一调控作用。
- 陈楠赵青王伟铭卢健
- 关键词：转化生长因子Β1肾小管上皮细胞结缔组织生长因子基因启动子丝裂原激活蛋白激酶
- Huntington 舞蹈病的基因诊断研究被引量：1
- 1997年
- Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ舞蹈病的基因诊断研究于丽莉程新建陆振虞卢健冯际平冯波王亚新Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ舞蹈病（ＨＤ）是基底神经节和大脑皮层的变性病，该病特征为中年发病，病程呈进行性，属于常染色体显性遗传性疾病。１９９３年发现与ＨＤ有关的新基因ＩＴ１５［１...
- 于丽莉程新建陆振虞卢健冯际平冯波王亚新
- 关键词：舞蹈病亨廷顿氏舞蹈病HD基因诊断
- 人FⅧ基因高效表达质粒的构建及其在Cos-7细胞中的表达被引量：4
- 1998年
- 目的：构建人ＦⅧ真核表达质粒——ｐＡｄＣＭＶＬｉｎｋＦⅧＤＢ并观察其在Ｃｏｓ－７细胞中的表达活性。方法：采用缺失大部分Ｂ结构域的人凝血因子ⅧｃＤＮＡ（ＦⅧＤＢ），长度为４．６ｋｂ，将其插入含腺病毒序列表达质粒——ｐＡｄＣＭＶＬｉｎｋ１，构建了ＦⅧ真核表达质粒——ｐＡｄＣＭＶＬｉｎｋＦⅧＤＢ，用脂质体介导法将其转染Ｃｏｓ－７细胞，转染后２４，４８，７２小时分别用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、ＥＬＩＳＡ法及一期法测定培养细胞中ＦⅧＤＢｍＲＮＡ及ＦⅧ的含量与活性。结果：ＲＴ－ＰＣＲ法可检测到ＦⅧＤＢｃＤＮＡ转录的ｍＲＮＡ，ＥＬＩＳＡ法测得７２小时后ＦⅧ的含量为每２４小时１８ｎｇ／１０６细胞，一期法测得活性为每２４小时０．６Ｕ／１０６细胞，相当于正常人血浆中１００μｇ／ＬＦⅧ所产生的凝血活性的６０％。结论：所构建的ＦⅧ真核表达质粒在Ｃｏｓ－７细胞中具有一定的表达活性。
- 卢健姜志龙陈诗书
- 关键词：血友病A真核表达质粒COS-7细胞
- 基于学生创新能力培养的基础医学实验教学改革被引量：12
- 2011年
- 目的提高基础医学实验教学在培养学生创新能力中的作用。方法调整上海交通大学医学院基础医学实验教学架构，重组综合性基础医学教学实验室和课程体系。结果构建了多学科交叉融合的整合式实验教学课程体系：基础性实验、综合性实验和设计性实验；实施了“以探究为基础学习”的教学方法；编写了多学科整合式实验教材；研发了数字化虚拟实验，创新了实验教学手段；建立了多元化、综合考核方式，评价实验教学质量。结论基础医学实验教学改革有利于学生实践能力和创新能力的培养。
- 丁文龙肖家祁李稻卢健冯京生徐大刚郁松孙岳平
- 关键词：实验教学教学改革
- 人CCAAT／增强子—结合蛋白ε研究进展被引量：2
- 2005年
- 人核内转录因子C／EBP ε属于CCAAT/增强子-结合蛋白(CCAAT／enhancer-binding protein,C／EBP)家族成员,特异性表达于造血系统,对體系细胞增殖与分化具有重要作用,参与了一系列體系特异性基因的转录调控。本文就C／EBP ε基因的结构、调控机制以及产物的生物学功能进行综述。
- 蔡蓉卢健
- 关键词：转录调控
- 核心蛋白聚糖基因治疗肾功能衰竭大鼠的实验研究被引量：1
- 2003年
- 目的 利用已转染核心蛋白聚糖(DCN)的成纤维细胞可表达DCN,以中和肾功能衰竭(肾衰)大鼠肾组织内增高的TGF-β1活性,探索基因治疗肾功能不全的新途径。方法 选用雄性SD大鼠在无菌条件下采用5/6肾脏大部分切除。假手术组(A组)6只,5/6肾切除肾衰大鼠模型建立后随机分组,手术对照组(不予任何处理,为B组)10只,空白对照组[成纤维细胞FB(LXSN)细胞处理组,为C组110只,治疗组[FB(LDCNSN)细胞处理组,为D组]10只。4周后观察体重、血脂、肾功能、肾组织病理学变化,并应用免疫组织化学方法检测肾组织内TGF-β1和DCN的表达。结果 经不同处理4周后,各组大鼠在体重和血脂方面各组之间差异无显著性意义。D组大鼠BUN、Scr水平与C组相比有显著下降(P<0.05),而与其基础值相比较虽有所升高,但差异无显著性意义。D组肾衰大鼠4周后,DCN在肾组织内的表达明显增加,与各组比较,差异有显著性意义;而TGF-β1的表达与B组和C组比较差异无显著性意义。同时,病理上也显示D组大鼠肾间质损害明显减轻,与B组和C组比较,差异有显著性意义。结论 通过转染DCN的成纤维细胞转导至肾脏,可在肾脏局部表达DCN。高表达的DCN可改善肾纤维化,延缓肾衰的进程。
- 王伟铭陈楠卢健王朝晖李娅陈诗书董德长
- 关键词：核心蛋白聚糖基因治疗肾功能衰竭基因转染肾间质
- CArG调控元件辐射诱导活性的研究
- 2006年
- 目的构建含有人工合成CArG调控元件的荧光素酶报告基因重组质粒,研究该元件在多种肿瘤细胞中不同剂量放射线照射下的放射诱导活性。方法将含有9个串联的CCATATAAGG结构的CArG增强子与CMVIEbasalgenepromoter构成的嵌合调控元件插入到pGL3Basic质粒,构建荧光素酶报告质粒。利用脂质体将该报告质粒瞬时转染肿瘤细胞株HeLa、A549、HepG2,给予不同剂量137Csγ射线照射,36h后检测荧光素酶活性,观察该调控序列的放射诱导活性。结果该CArG调控元件在低剂量放射线的诱导下能明显增强下游基因的表达,在3Gy的γ射线照射下诱导活性最强。结论人工合成的CArG调控元件在低剂量的放射线作用下能有效诱导下游基因的表达,在肿瘤的放射-基因治疗中具有较强的应用潜力。
- 徐让卢健钱关祥
- 关键词：基因治疗肿瘤细胞
