刘芸 作品数:30 被引量:69 H指数:5 供职机构: 南方医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省自然科学基金 长江学者和创新团队发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 更多>>
人肺泡Ⅱ型上皮A549细胞特异性靶向肽的筛选及验证 2015年 目的:利用噬菌体随机肽库筛选与人肺泡Ⅱ型上皮A549细胞存在特异性结合的多肽,为实现对肺泡Ⅱ型上皮细胞的靶向干预和开发针对急性肺损伤等呼吸系统疾病治疗的导向药物载体提供实验依据。方法:采用全细胞筛选的方式,通过对人肺泡Ⅱ型上皮A549细胞的4轮筛选和与人前列腺癌上皮PC-3细胞的差减筛选,从噬菌体随机肽库中筛选出与人肺泡Ⅱ型上皮A549细胞存在特异性结合的多肽,选择丰度较高的一条命名为NTG,用其构建含有增强绿色荧光蛋白(EGFP)的原核表达载体,转化感受态细菌,层析法获得重组蛋白His-NTG-EGFP,测定其分子质量。向A549细胞和PC-3细胞分别加入含有重组蛋白His-NTG-EGFP或His-EGFP的培养基,荧光显微镜下观察。结果:从第1轮至第4轮,淘选所得的噬菌体回收率逐步提高,经过PC-3细胞差减筛选,少量的与A549细胞存在特异性结合的噬菌体得到了回收。重组表达并纯化得到的His-NTG-EGFP,测定其分子质量为33 k D,与预期相符。荧光显微镜下观察发现,经融合蛋白His-NTG-EGFP处理后的A549细胞表面有绿色荧光分布,经融合蛋白His-NTG-EGFP处理后的PC-3细胞以及经对照蛋白处理的A549细胞和PC-3细胞表面均未出现绿色荧光,说明这一融合蛋白可以特异性结合A549细胞。结论:人肺泡Ⅱ型上皮A549细胞特异性靶向肽被成功获得。 刘芸 邱妙娟 邱柏钦 李锦梅关键词:肺损伤 急性 医学院校仪器分析课程教学缺陷分析 被引量:2 2009年 仪器分析课程作为许多医学院校学生的专业必修课程,得到了系统化和规范化的发展和推广。通过深入剖析,从五个方面总结并列举了教学中存在着的具有共性的误区,并对这些问题存在的根源和解决方法进行了思考和初步的探讨。 刘芸 赵清 张琳 姜勇关键词:仪器分析 教学方法 医学院校 细胞穿透肽应用的研究进展 被引量:5 2014年 细胞穿透肽是一类具有特殊细胞膜穿透作用的短肽,研究发现其为药物大分子物质的细胞内转运提供了有力工具,现已得到了广泛关注和大量研究.一方面,近年来发现,细胞穿透肽的应用面临着药物释放率、代谢降解、细胞系的分化状态和Rho-GTPases活性的依赖性等问题,从而阻碍了其研究开发的进程.另一方面,细胞穿透肽在肿瘤治疗、抗菌和抗炎靶向药物等方面的研究却取得了显著的进展,甚至进入了临床前和临床研究阶段.本文围绕细胞穿透肽在应用开发中所面临的挑战和机遇两方面,综述了近期的研究进展,并对细胞穿透肽在新领域中的应用进行了展望. 刘芸 李锦梅 谭婷 姜勇关键词:细胞穿透肽 带中性电荷的细胞穿透肽及作为细胞内运送载体的用途 一类带中性电荷细胞穿透肽,在生理条件下净电荷为0,并提供具体的氨基酸序列。并提供中性电荷细胞穿透肽作为细胞内运送载体的用途以及带中性电荷细胞穿透肽作为治疗药物在细胞内的运送载体的医药用途及作为造影剂在细胞内的运送载体的医... 姜勇 刘芸 罗海华文献传递 过氧化物酶蛋白1真核表达载体构建及在Hela细胞的表达与定位 2012年 目的:构建过氧化物酶蛋白1(PRDX 1)的真核表达载体,观察其在Hela细胞内表达及定位。方法:提取BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR方法扩增得到小鼠PRDX 1编码序列,酶切后克隆至pcDNA3-myc载体。重组质粒通过PCR、酶切、测序证明构建正确后经脂质体转染Hela细胞,然后利用Western blot和荧光显微镜技术观察该融合蛋白在细胞内表达及定位。结果:经鉴定证明重组质粒构建正确;Western blot实验显示,该质粒能够在Hela细胞中特异表达;免疫荧光试验显示,蛋白产物分布在胞浆和胞核,证明该蛋白在细胞内高表达。结论:成功构建带有myc标签的PRDX 1真核表达载体,该质粒能够在哺乳细胞中特异表达并且外源性PRDX 1蛋白分布在Hela细胞胞浆胞核内,为深入研究PRDX 1蛋白在细胞内相关生物学研究奠定了基础。 刘震西 康瑞霞 刘芸 胡水旺 樊启黄 李玉花 姜勇关键词:分子克隆 深圳市3岁儿童乳牙患龋状况抽样调查 被引量:16 2020年 目的:了解深圳市3岁儿童乳牙龋病现状,为深圳市儿童口腔保健工作提供信息支持。方法:采用分层整群随机抽样的方法,按照第四次全国口腔健康流行病学调查龋病检查标准,使用社区牙周指数(community periodontal index,CPI)探针检查深圳市2166名3岁儿童的乳牙患龋情况,计算患龋率、龋均及充填率等。结果:深圳市3岁儿童患龋率为56.46%,龋均为3.08,龋失补构成比为龋95.08%、龋失0.06%、龋补4.86%。患龋率在不同性别间的差异无统计学意义,上颌牙患龋率显著高于下颌牙,上颌乳中切牙是最容易发生龋齿的牙位。结论:深圳市3岁儿童乳牙患龋状况较为严重,95%以上龋齿未经治疗,应进一步加强及重视儿童乳牙龋病的预防工作。 刘芸 郝高峰 孙晋 谢素芬 张强关键词:乳牙 龋病 口腔流行病学 儿童 下颌乳中切牙釉质表层钙含量分析 被引量:2 2014年 目的研究正常下颌乳中切牙釉质表层50μm内钙含量及分布,探讨其与年龄、龋患状况之间的关系。方法运用电子探针显微分析仪测定40颗离体下颌乳中切牙釉质表层50μm内不同深度钙含量,并以标本所在个体的年龄、龋患状况分组,对于不同深度钙含量差异、钙含量与年龄及龋患状况之间的关系分别进行统计学分析。结果下颌乳中切牙釉质表层50μm内钙含量均值为(38.39±0.92)%,不同深度、不同年龄、不同龋患状况组间钙含量均无统计学差异。仅下颌乳中切牙釉质表面下40μm处钙含量与龋补牙数之间呈低度负相关关系(r=-0.3573,P<0.05),其余相关分析结果均无统计学意义。结论正常下颌乳中切牙釉质表层50μm内钙分布呈均质状态,其钙含量与年龄无明显相关关系,发育正常的下颌乳中切牙釉质表层钙含量不能作为反映个体龋患状况的单一指标。 刘芸 石四箴关键词:牙釉质 钙 利用噬菌体展示技术构建细胞穿透肽表达文库的方法 一种利用噬菌体展示技术构建细胞穿透肽表达文库的方法,采用噬菌体展示技术,结合全细胞筛选模式,筛选具有细胞膜穿透活性的多肽;再利用所筛选的胞穿透肽构建细胞穿透肽原核表达文库。选用Ph.D.‑C7C噬菌体展示肽库,将随机七肽... 姜勇 刘芸 罗海华文献传递 组蛋白乙酰化在慢性牙周炎来源牙周膜干细胞成骨分化中的作用 2019年 表观遗传是指基因序列不发生改变的前提下,基因表达却发生改变,且这种改变能够遗传至后代。其中,组蛋白乙酰化属于表观遗传范畴中重要的一种类型。现有的研究表明慢性牙周炎的发生与表观遗传修饰具有一定的关系。结合已有研究,本文对组蛋白乙酰化在慢性牙周炎来源牙周膜干细胞成骨分化中的作用作一综述。 孙晋 刘芸 屈茜 曲娟 罗纬 张锋 吴敏关键词:组蛋白乙酰化 慢性牙周炎 牙周膜干细胞 成骨分化 串联亲和纯化标记的HMGB1细胞因子诱导片段1融合表达载体构建和蛋白纯化及其功能初步探讨 2009年 目的:构建高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中细胞因子诱导片段1(CIF1)与串联亲和纯化(TAP)系统中纯化标签链霉亲和素结合肽(SBP)和钙调蛋白结合肽(CBP)序列相融合的原核表达载体,观察重组蛋白对小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,为HMGB1参与炎症反应作用机制的研究以及CIF1结构域细胞膜表面受体蛋白的获得和鉴定奠定基础。方法:采用PCR方法分别扩增出CBP-SBP和CIF1的编码序列,构建表达质粒pET-14b/CBP-SBP-CIF。利用Ni-NTA亲和树脂纯化融合蛋白,纯度达85%以上。采用纯化后的蛋白诱导小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞RAW264.7,利用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测RAW264.7细胞释放TNF-α的水平变化。结果:表达载体构建正确,CIF1重组蛋白表达量高,纯度好。当蛋白浓度大于0.5ng/μl时,CIF1重组蛋白诱导细胞TNF-α的分泌量与对照组相比差异具有显著性(P<0.05),并且在CIF1蛋白浓度0~2.5ng/μl范围内,TNF-α的分泌量与CIF1重组蛋白的浓度呈显著的剂量依赖关系。结论:原核表达纯化了His-CBP-SBP-CIF1融合蛋白,该融合蛋白可以有效地作用于巨噬样细胞内的信号转导过程,介导了炎症因子TNF-α的分泌表达。 刘芸 邓鹏 刘铮 徐佳 吴向玲 姜勇关键词:高迁移率族蛋白B1