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陈伟: 作品数：24 被引量：70H指数：6; 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>; 发文基金：国家科技重大专项中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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光阻法检测治疗性抗体不溶性微粒的取样方式探讨被引量：2: 2017年; 目的:考察不同取样方式对光阻法检测小装量治疗性抗体不溶性微粒的影响。方法:采用光阻法对体积小于25 m L的19个靶点65个批次治疗性抗体中≥2μm、≥10μm和≥25μm的不溶性微粒进行检测,将抗体分为3组,取样方式分别为单支样品不同取样体积(0.5、1、3 m L)检测与合并样品(取样体积5 m L)检测,合并样品不同取样体积(0.5、1、3、5 m L)检测,以及合并样品后稀释(稀释20、10、5倍)检测与合并样品原倍检测。结果:对于≥2μm、≥10μm、≥25μm的不溶性微粒,不管是采用单支样品不同取样体积还是采用合并样品后不同取样体积,与合并样品后每次取样5 m L的不溶性微粒检测结果相比,均没有统计学意义上的差异;且≥2μm不溶性微粒的取样体积变异小于≥10μm、≥25μm的不溶性微粒。合并样品后稀释检测的结果则与合并样品检测的结果具有统计学差异,且稀释后的结果要高于未稀释的结果,稀释倍数越大,与未稀释结果的差异也越大。结论:采用光阻法对体积小于25 m L的小装量治疗性抗体进行不溶性微粒检测时,为节省样品并减少外源微粒污染,不管单支取样还是合并取样,均可首先考虑选择小于5 m L的单次取样体积进行检测,而对合并后稀释检测的方式应慎重选择。; 郭莎曹俊霞倪永波于传飞刘春雨李萌张峰王文波陈伟高凯王兰; 关键词：药品检验取样方法光阻法治疗性抗体不溶性微粒

治疗性单克隆抗体电荷异质性分析方法比较被引量：4: 2017年; 目的:对4种常用的单抗电荷异质性分析方法进行比对研究。方法:以重组抗TNFα全人源单克隆抗体为例,分别利用离子交换色谱(IEC)、毛细管区带电泳(CZE)、毛细管等电聚焦电泳(CIEF)和成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)4种方法对该抗体的电荷异质性进行分析;利用CIEF和iCIEF 2种方法对抗体主峰等电点(pI)进行分析。结果:4种方法能够对重组抗TNFα全人源单克隆抗体的电荷异构体进行有效的分离和定量,其中IEC和CZE 2种方法检测的电荷异构体峰面积百分比(酸性峰、主峰和碱性峰)较为一致,4种方法检测的碱性峰比例较一致,CIEF和iCIEF检测的主峰与酸性峰比例较其他方法偏高。CIEF和iCIEF检测抗体主峰等电点具有一定差异,其中,聚焦时间长短和pI Marker的选择是影响单抗pI值检测的主要因素。结论:通过抗体电荷异质性分析方法的比较研究可见,在单抗电荷异构体比例和主峰pI测定上4种方法具有一定的差异。对单抗的质控应结合产品特性和表征研究,合理选择电荷异质性分析方法。; 王文波武刚于传飞张峰刘春雨李萌陈伟郭莎高凯王兰; 关键词：单克隆抗体等电点毛细管电泳离子交换色谱

重组单抗药物质控中物理检查的有关问题探讨被引量：6: 2015年; 重组单抗药物的物理检查是其质量控制的必要环节,对于评价制品的功能非常重要,对单抗药物安全、有效、质量可控具有重要意义。本文通过阐述物理检查项目中澄清度、浊度、不溶性微粒、澄明度、可见异物和颜色等关键概念及其部分概念表述变化的历史沿革、相似概念的理解和辨析,探讨了中国药典、欧洲药典在上述试验方法的差异,进一步解决了注册检验中物理检查遇到的常见问题,为国内外单抗制品注册检验的相关工作提供参考。; 李萌于传飞王兰刘春雨张峰王文波陈伟郭玮高凯王军志; 关键词：单抗澄清度浊度不溶性微粒

重组白介素22-Fc融合蛋白质控方法与质量标准研究被引量：1: 2015年; 目的:研究建立重组人白介素22-Fc融合蛋白的质控方法。方法:通过刺激COLO 205细胞产生白介素10并测定其含量的方法测定该融合蛋白生物学活性;采用SDS-PAGE及高效液相色谱法测定其纯度;采用实时荧光定量PCR方法测定外源DNA残留量;其余项目按中国药典三部(2010年版)要求进行。结果:该制品3批原液及成品的平均生物学活性分别为参考品的100.6%与103.1%;定量PCR测得3批原液的外源DNA残留量均小于100 pg·剂量-1;其他各项指标均符合中国药典三部(2010年版)要求。结论:研究建立的质控方法和质量标准可用于重组人白介素22-Fc融合蛋白的常规质量控制。; 陶磊韩春梅陈伟杨靖清丁有学毕华饶春明王军志; 关键词：融合蛋白生物学活性

重组抗埃博拉病毒单克隆抗体质控方法的建立被引量：7: 2016年; 目的重组抗埃博拉病毒抗体是由3种抗埃博拉病毒包膜糖蛋白(GP)的单抗组成的复方抗体,本实验分别对3种重组单抗的质控方法进行研究。方法利用ELISA方法测定重组抗埃博拉病毒单抗的结合活性;利用LC-MS肽图法对其进行鉴别;CE-SDS和SE-HPLC测定纯度;i CIEF法测定等电点及电荷异质性;切糖后对N-糖进行2AB标记,用正向色谱结合质谱对其糖型和含岩藻糖修饰糖型比例分析;利用高效液相色谱法测定其聚山梨酯20含量。结果 3种重组抗埃博拉病毒单抗结合活性的EC50为(12.53±1.62)、(11.10±0.62)、(6.09±0.35)ng·m L^(-1);LC-MS肽图法测定一级序列覆盖率均大于95%;非还原CE-SDS主峰纯度分别为(94.41±0.05)%、(95.58±0.17)%、(96.11±0.05)%;还原CE-SDS重链和轻链纯度之和分别为(98.19±0.06)%、(97.97±0.03)%、(98.57±0.03)%;SE-HPLC主峰分别为(99.59±0.01)%、(99.56±0.01)%、(99.74±0.01)%;i CIEF分析主峰等电点为(8.70±0.01)、(8.26±0.01)、(8.85±0.01);3种单抗聚山梨酯20含量分别为(0.34±0.00)、(0.35±0.00)、(0.35±0.01)mg·m L^(-1);LC-MS对N糖谱分析相对灵敏,3种单抗含岩藻糖糖型比例均小于0.5%。结论本实验的质控方法研究运用了现代化质控理念,建立的质控方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,为突发状况下埃博拉疫情防控提供了用药储备的技术支持,也为其他组合抗体的质量控制积累了经验。; 王文波王兰于传飞张峰刘春雨李萌陈伟高凯

抗体偶联药物抗CD30-vc-MMAE的异质性分析被引量：2: 2016年; 目的建立一种基于半胱氨酸偶联方式的抗体偶联药物(antibody-drug conjugates,ADCs)抗CD30-vc-MMAE异质性分析的质控方法。方法本实验应用了分子排阻色谱(SEC-HPLC)、毛细管电泳(CE-SDS)以及实时成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)等分析方法,对抗体偶联药物抗CD30-vc-MMAE的大小异质性和电荷异质性进行了分析。结果SEC-HPLC分析的纯度为(95.69±0.01)%;还原CE-SDS分析的纯度为(98.38±0.25)%,非还原CE-SDS可分离开6个主要峰,纯度之和为(97.82±0.44)%;和裸抗药物类似,iCIEF可有效的将酸区,碱区和主峰抗体进行较好地分离,主峰区的峰面积百分比为(43.52±2.03)%。结论初步建立了一种基于半胱氨酸偶联方式的ADC药物抗CD30-vcMMAE异质性分析的质控方法 ,为此类生物制品的质量控制提供参考。; 李萌朱磊武刚崔永霏于传飞刘春雨张峰王文波陈伟高凯王兰

曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物对不同乳腺癌细胞系的生物学效应研究被引量：2: 2016年; 目的研究曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物(T-DM1)对BT-474和HCC1954两种乳腺癌细胞系的不同生物学效应。方法运用流式细胞术检测两种细胞系中人表皮生长因子受体2(HER2)表达水平;运用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物与人表皮生长因子受体2抗原的结合能力;运用细胞增殖抑制/杀伤法,检测曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物对两种细胞系的剂量反应曲线。结果人表皮生长因子受体2在两种细胞系中表达水平均较高;曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物与人表皮生长因子受体2抗原的结合能力相似;曲妥珠对BT474具有增殖抑制作用,但是对HCC1954无作用,曲妥珠单抗美坦新衍生物则对BT474和HCC1953均具有杀伤作用。结论在细胞学模型中,曲妥珠单抗美坦新衍生物可以对人表皮生长因子受体2高表达但是曲妥珠耐药的细胞系具有生物学效应。; 王兰于传飞杨雅岚武刚郭莎刘春雨张峰王文波李萌陈伟高凯; 关键词：耐药

人源化抗血管内皮生长因子单克隆抗体质控方法的建立被引量：7: 2016年; 目的建立人源化抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)单克隆抗体的质控方法。方法采用还原/非还原型毛细管凝胶电泳(CE-SDS)测定人源化抗VEGF单抗的纯度;在0.5和25.0 mg·m L^(-1)浓度条件下,采用分子排阻高效液相色谱(SE-HPLC)测定制品中单体和聚合物含量;毛细管等电聚焦电泳(c IEF)测定其等电点;阳离子交换高效色谱(CEXHPLC)测定电荷异构体含量;反相高效色谱(RP-HPLC)和LC-MS检测Lys-C酶切后制品肽图;人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,Hu VEC)增殖抑制试验测定其生物学活性;其余项目按照2015年版《中国药典》要求进行。结果人源化抗VEGF单抗原液和成品的还原型CE-SDS的纯度分别(97.77±0.25)%和(97.43±0.57)%,非还原型CE-SDS纯度分别为(98.97±0.15)%和(98.73±0.06)%;0.5 mg·m L^(-1)浓度下,原液和成品的单体含量分别为(98.07±0.55)%和(98.20±0.52)%;25.0 mg·m L^(-1)浓度下,原液和成品的聚合物含量分别为(2.00±0.53)%和(1.93±0.55)%;CEX-HPLC检测原液和成品的酸性区含量分别为(18.33±0.64)%和(18.60±0.44)%,主峰含量分别为(69.03±0.80)%和(69.20±0.44)%,碱性区含量分别为(12.70±1.37)%和(12.20±0.87)%;c IEF和LC-MS测定原液和成品的等电点和肽图均与参比品一致;HUVEC增殖抑制法测定原液和成品的生物学活性分别为参比品的(107±6)%和(100±10)%。其他各项指标均符合《中国药典》要求及其他相关要求。结论初步建立了人源化抗VEGF单克隆抗体的质控方法,可用于该制品的常规质量控制。; 张峰于传飞王文波李萌朱磊陈伟刘春雨郭莎高凯王兰; 关键词：人血管内皮生长因子人源化抗体

液质联用进行干扰素理化对照品的一级结构鉴定及比对研究被引量：12: 2015年; 应用UPLC与质谱联用技术对5个厂家生产的重组人干扰素理化对照品进行一级结构鉴定及比对研究。通过测定质谱分子量及胰蛋白酶酶解肽图,对其氨基酸序列进行验证,并对二硫键连接方式等翻译后修饰进行分析鉴定。结果 5份对照品的实测分子量均与理论一致;液质肽图结果显示各样品的氨基酸序列均与理论一致;4批样品的二硫键连接方式为Cys1-Cys98、Cys29-Cys138,1批为Cys29-Cys139、Cys86-Cys99;部分样品存在N-末端"+Met"、乙酰化及蛋氨酸氧化等翻译后修饰。液质联用技术可用于干扰素理化对照品的一级结构鉴定及不同厂家产品的比对研究。; 陶磊裴德宁韩春梅陈伟饶春明王军志; 关键词：液质联用干扰素

抗表皮生长因子受体2单克隆抗体质量控制中的趋势分析被引量：2: 2015年; 目的对抗表皮生长因子2单克隆抗体的质量控制项目进行趋势分析。方法利用BT-474细胞株作为靶细胞，通过细胞增殖抑制作用，使用CellTiter 96 AQueous检测试剂盒进行抗表皮生长因子受体2单抗的生物学活性检测，以抗表皮生长因子受体2单抗参比品通过平行线分析的方法计算供试品效价；采用阳离子交换色谱方法，按面积归一化法计算主峰面积百分比进行抗体纯度检测。采用紫外分光光度法进行蛋白质含量检测；采用电位法进行pH值检测；通过对中国食品药品检定研究院（NIFDC）和企业质控实验室多批次抗表皮生长因子2单抗的检测结果，分别建立警戒限（x^-±2s）和行动限（x^-±3s），绘制趋势分析图，并对检测结果进行连续性及周期性趋势分析。结果对2012—2014年某企业74批抗表皮生长因子2单抗的生物学活性检测结果显示，抗表皮生长因子受体2单抗供试品和参比品在生物学活性中均存在量效关系，在半对数坐标纸上呈平行的直线分布。生物学活性效价均值中国食品药品检定研究院与企业分别为（1．04±0．11）×10^4和（0．94±0．08）×10^4U·mg^-1；蛋白质含量均值分别为（442．15±13．59）和（442．07±6．60）mg·瓶^-1；离子交换色谱主峰面积均值分别为（76．29±1．36）％和（73．76±1．17）％；pH值均值分别为（6．16±0．11）和（6．22±0．08）。对上述结果进行连续性和周期性趋势分析，总体趋势较平稳。结论首次通过对抗表皮生长因子受体2单克隆抗体的部分关键质量属性（CQA）趋势分析，反映了制品的变化情况，对评价单抗的批间一致性和生产工艺稳定性提供了参考，为其他单抗质量控制中关键质量属性的趋势分析提供重要指导和借鉴。; 刘春雨王兰郭玮于传飞张峰王文波李萌陈伟高凯

陈伟

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